脑血管疾病基础的研究

摘 要
目的：研究SB202190对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响，探讨SB202190在脑缺血保护中的作用及可能机制。
方法：采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。健康雄性SD大鼠，随机分成五组：空白对照组、假手术组、缺血再灌注组、给药组及溶媒组。每组6只大鼠，给药组及溶媒组分别侧脑室注射p38MAPK特异性抑制剂SB202190及1 %DMSO。各组分别进行大鼠神经功能的行为学评分；Nissl染色观察缺血区细胞形态变化；免疫组化检测Bcl-2、Bax阳性神经元；免疫印迹方法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达变化。
结果：（1）神经功能改变：空白对照组及假手术组的大鼠神经功能评分均为满分，缺血再灌注后24h大鼠神经功能评分显著低于假手术组，有统计学差异（P < 0.05），给药组大鼠神经功能评分显著高于缺血再灌注组，有统计学差异（P < 0.05）。而溶媒组神经功能评分与缺血再灌注组相比无统计学差异（P > 0.05）。
（2）细胞形态变化：空白对照组及假手术组：镜下可见神经元细胞胞浆染成蓝色，胞浆内可见蓝紫色的Nissl小体，胞核呈饱满的淡蓝色，细胞排列整齐，形态饱满，无细胞坏死；缺血再灌注组：再灌注后24h镜下可见大部分细胞萎缩，胞浆减少，胞核浓染，细胞间隙增大；给药组：与缺血再灌注组相比再灌注后24h细胞形态较好，坏死程度较轻。
（3）免疫组化检测结果：空白对照组及假手术组：可见极少数Bcl-2、Bax阳性细胞散在分布，两组间无统计学差异(P > 0.05)；再灌注后24h可见大量Bax阳性细胞，与假手术组相比有统计学差异（P < 0.05），而Bcl-2阳性细胞无明显变化（P >0.05）；给药组：与缺血再灌注组比较再灌注后24h Bax阳性细胞明显减少，有统计学差异（P < 0.05），Bcl-2阳性细胞与缺血再灌注组比较明显增多，有统计学差异（P < 0.05），而溶媒组与缺血再灌注组相比无明显差异。
（4）免疫印迹方法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达：空白对照组及假手术组：可见少量Bcl-2、Bax蛋白表达，两组间无统计学差异(P > 0.05)；再灌注后24h可见Bcl-2表达减少，但与空白对照组及假手术组相比无统计学差异(P> 0.05)；而再灌注后24h可见Bax蛋白表达明显增加，与空白对照组及假手术组相比有统计学差异(P< 0.05)；给药组：与缺血再灌注组比较再灌注后24h可见Bax蛋白表达明显减少(P< 0.05)；而再灌注后24h可见Bcl-2蛋白表达明显增加（P < 0.05）。
结论：1．p38MAPK特异性抑制剂SB202190可以改善大鼠局灶性脑缺血再灌注后产生的神经功能缺损症状；2．SB202190可以减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注后的神经细胞形态学改变；3． SB202190能改变局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2及Bax的表达，这可能是SB202190抗细胞凋亡的机制之一。

关键词：大鼠 中枢神经系统 缺血再灌注损伤 SB202190 凋亡 Bcl-2 Bax
目 录
缩略词表 …………………………………………………………………………… 1
中文摘要 …………………………………………………………………………… 2
英文摘要 …………………………………………………………………………… 4
前言 ………………………………………………………………………………… 7
材料和方法 ………………………………………………………………………… 9
1．材料…………………………………………………………………………… 9
2．方法…………………………………………………………………………… 10
结果 ………………………………………………………………………………… 15
讨论 ………………………………………………………………………………… 17
结论 ………………………………………………………………………………… 24
论文图片 …………………………………………………………………………… 25
参考文献 …………………………………………………………………………… 33
综述 ………………………………………………………………………………… 37
培训小结 …………………………………………………………………………… 47
致谢 ………………………………………………………………………………… 48
论文声明 …………………………………………………………………………… 49


英文缩略语表（Abbreviations）

CCA common carotid artery 颈总动脉
DAB diaminobenzidine 二氨基联苯胺
ICA internal carotid artery 颈内动脉
MCAO/R middle cerebral artery 大脑中动脉缺血再灌注
occlusion / reperfusion
I/R ischemia/reperfusion 缺血再灌注
I ischemia/reperfusion group 缺血组再灌注组
N Normal control group 空白对照组
S Sham group 假手术组
SB SB202190 group SB202190组
DM DMSO group DMSO组
I Ischemia/reperfusion group 缺血再灌注组
S-D rat Sprague-Dawley rat 斯普拉格-道利鼠
TNF Tumo necrosis factor 肿瘤坏死因子